UV 함량 분석은 한 파장에서 흡광하는 모든 것을 집계합니다. HPLC는 먼저 화합물을 분리한 뒤 방법에 명시된 화합물을 집계합니다. 두 수치는 서로 다른 질문에 답합니다.
같은 추출물로 보이는 소재에 대해 두 건의 제안이 도착합니다. 한쪽은 활성 성분 함량을 UV로, 다른 쪽은 HPLC로 기재했고, UV 수치가 분명히 더 높습니다. 어느 쪽도 꼭 틀린 것은 아니며, 소재가 같을 수도 있습니다. 두 방법은 서로 다른 것을 집계하며, 각각 결과를 명명된 물질을 기준으로 표시합니다.
두 함량 수치를 비교하기 전에, 또는 성적서를 귀사 자체 시험실의 결과와 비교하기 전에 확인할 여섯 가지 사항을 소개합니다. 이 글은 생약 의약품에 관한 유럽 지침, 분석법 밸리데이션에 관한 국제 지침, 그리고 발표된 연구에 근거합니다. 예시는 당사 규격에서 가져왔습니다. 앞선 글들은 규격, 추출 비율, 시험성적서, 용매와 부형제, 오염물질 행을 다루었으며, 이 글은 함량 분석법만을 다룹니다.
01 / 방법
함량 행에 방법이 명시되어 있습니까?
함량 수치는 그것을 산출한 방법에 속합니다. 생약 의약품에 관한 유럽 지침은 이 점을 규격의 정의에 담고 있습니다. 규격은 “시험 항목의 목록, 분석 및 생물학적 절차에 대한 참조, 그리고 적절한 허용 기준”이며, 적합이란 물질이 “열거된 분석 절차에 따라 시험했을 때 열거된 허용 기준을 충족한다”는 뜻입니다.1
규격에서 방법은 흔히 수치 뒤에 오는 짧은 단어 하나입니다. UV, HPLC 또는 다른 기법입니다. 이것이 없는 행은 불완전합니다. American Botanical Council과 협력 기관 소속 저자들이 2023년에 발표한 리뷰는 분광광도 분석의 결과가 “시험성적서에 제시되는 식물 원료의 화학 조성에 관한 유일한 데이터인 경우도 있다”고 지적하며, 정량 결과의 근거가 되는 방법론을 밝히는 것이 “업계의 표준 관행이 되어야 한다”고 덧붙입니다.2
확인 사항: 함량 행에 방법이 명시되어 있는지, 그리고 규격, 견적, 성적서가 모두 같은 방법을 명시하고 있는지.
02 / UV
UV 수치는 무엇을 집계합니까?
규격에서 UV는 자외-가시선 분광광도법을 뜻합니다. 추출물을 용해하고, 많은 분석에서는 시약이 대상 화합물을 유색 생성물로 바꾸며, 용액이 한 파장에서 흡수하는 빛을 측정합니다. 용액 속의 화합물은 서로 분리되지 않으므로, 그 파장에서 흡광하는 모든 것이 결과에 더해집니다.2
리뷰는 그 결과를 이렇게 서술합니다. 분광광도법으로 얻은 농도는 “관심 파장에서 흡광하는 비표적 분석물의 간섭 때문에 다른 정량 방법의 결과보다 높게 나오는 경우가 많다”고 합니다. 예로 든 것은 밀크씨슬 추출물로, 실리마린 농도는 “일반적으로 HPLC-UV로는 30%에서 65% 사이, 분광광도 시험으로는 65–80%이다”라고 합니다.2
분석법 밸리데이션 지침에는 이 성질을 가리키는 이름이 있습니다. 특이성과 선택성은 “분석물의 측정에 다른 물질이 간섭하는 정도”를 설명합니다.3 생약 의약품에 관한 유럽 지침은 UV-가시선 함량 분석을 비특이적 함량 분석의 예로 듭니다.1 따라서 UV 수치는 화합물군에 대한 수치이며, 그렇게 읽어야 합니다.
확인 사항: UV 수치의 경우 어떤 화합물군을 집계하려는 것인지, 그리고 방법에서 사용하는 시약과 파장.
03 / HPLC
HPLC 수치는 무엇을 집계합니까?
HPLC, 즉 고성능 액체 크로마토그래피는 측정에 앞서 먼저 용해한 추출물을 개별 화합물로 분리합니다. 그러면 화합물이 별개의 피크로 나타나고, 방법은 명시된 피크를 집계합니다. 컬럼 뒤의 검출기도 대개 빛을 측정합니다. 리뷰는 UV/vis 검출기를 “가장 널리 사용되는 검출 시스템”이라고 부릅니다.2 두 방법의 주된 차이는 분리에 있습니다.
따라서 HPLC 수치는 방법이 명시한 화합물, 즉 화합물 하나 또는 여러 화합물의 합계를 나타내며, 규격에는 그것이 어떤 화합물인지 기재되어 있어야 합니다. 유럽의약품청의 빌베리 보고서가 그 양상을 보여 줍니다. 이 보고서는 신선한 빌베리 열매의 정제된 표준화 건조 추출물에 대한 유럽약전의 정의를 인용합니다. “시아니딘 3-O-글루코사이드 클로라이드로 표시한” 안토시아닌 32.4%에서 39.6%입니다. 보고서가 기재한 이 분석의 크로마토그램에는 명명된 피크 스무 개가 나타납니다. 안토시아닌 열다섯 개와, 안토시아닌에서 당이 빠진 형태인 안토시아니딘 다섯 개입니다.4
방법이 명시하지 않은 화합물은 추출물에 아무리 많이 들어 있어도 집계되지 않습니다. 또한 일부 화합물군은 부분적으로만 분리할 수 있습니다. 리뷰에 따르면 프로안토시아니딘의 경우 큰 분자의 분리는 “크로마토그래피 수단으로는 어려우며, 따라서 공급업체는 일반적으로 정량 분석에 분광광도법을 사용한다”고 합니다.2
확인 사항: HPLC 수치의 경우 집계되는 화합물, 그리고 그 수치가 그 화합물들의 합계인지 명명된 하나의 화합물인지.
04 / 표준품
어떤 표준품을 기준으로 하며, 무엇으로 표시됩니까?
함량 분석에서는 어느 방법도 샘플에서 백분율을 바로 읽어 내지 않습니다. 기기의 신호는 명명된 물질을 기준으로 양으로 환산되며, 그 물질은 표준품으로 함께 측정되거나 계산에 포함되어 있습니다. 유럽 지침에서 표준품은 “동일성 및 순도 시험과 함량 부여를 위해” 사용됩니다.1 그러면 결과는 명명된 물질 또는 화합물군을 기준으로 표시됩니다. 생약 및 생약 제제의 표시에 관한 지침이 그 표현을 보여 줍니다. 센나잎은 “센노사이드 B로 계산한” 하이드록시안트라센 배당체, 은행잎 추출물은 “플라본 배당체로 표시한” 플라보노이드입니다.5 명명된 것이 항상 측정된 것은 아닙니다. 은행잎에 대한 약전 방법은 대개 산 가수분해 후에 플라보노이드를 정량하며, 이 과정에서 플라보노이드의 당이 떨어져 나옵니다.2
표준품을 바꾸면 방법과 소재가 그대로여도 수치가 달라집니다. 색 반응인 DMAC 분석으로 측정하는 크랜베리 프로안토시아니딘의 경우, 한 연구는 크랜베리 자체에서 만든 표준품을 쓰면 “프로시아니딘 A2로 측정한 값보다 2.2배 높은 값이 나왔다”고 보고합니다.6
분자의 형태도 중요합니다. 빌베리 보고서는 한 추출물을 “안토시아노사이드 36%, 안토시아니딘 25%에 해당”이라는 두 가지 수치로 설명합니다. 두 번째 수치는 같은 분자를 당 부분 없이 집계한 것입니다.4
당사의 크랜베리 추출물은 방법과 표준품을 명시하는 함량 기재의 예입니다. 이 제품은 BL-DMAC / UV-Vis로 측정하고 프로시아니딘 A2 당량으로 표시한 총 가용성 프로안토시아니딘(PACs) 30% 이상으로 규격화되어 있습니다. 이 분석은 프로시아니딘 A2를 표준품으로 사용하고 640 nm에서의 흡광도를 측정하며, 분리된 A형 PAC의 순도를 입증하지 않습니다. 서로 다른 분석법이나 보정 표준물질을 사용하여 얻은 결과는 자동으로 비교할 수 없습니다.
확인 사항: 표준품, 그리고 결과가 무엇으로 표시되는지: 명명된 하나의 화합물, 화합물군, 또는 당 부분을 포함하거나 포함하지 않은 분자.
05 / 선택
필요한 수치에는 어떤 방법이 맞습니까?
HPLC가 모든 경우에 더 나은 방법은 아닙니다. 밸리데이션 지침은 어떤 방법이든 밸리데이션이 입증해야 할 것을 이렇게 밝힙니다. “분석 절차가 의도한 목적에 적합하다는 것”입니다.3 지표성분이 하나 또는 소수의 화합물인 경우에는 분리 방법으로 이를 직접 집계할 수 있습니다. 크로마토그래피로 분리하지 못하는 화합물군 전체가 대상인 경우에는 화합물군 함량 분석이 일반적인 도구입니다.2
여러 시험실이 참여한 크랜베리 DMAC 분석 연구는 이를 “크랜베리 샘플의 총 PACs에 대한 간단하고 견고하며 비교적 특이적인 분광광도 분석”이라고 불렀고, “서로 다른 식품 유형 간의 농도 비교에는 적합하지 않을 수 있다”고 덧붙였습니다.7
화합물군 함량 분석은 화합물이 어디에서 왔는지 보여 줄 수 없습니다. 프로안토시아니딘에 쓰이는 색 반응 중 “서로 다른 기원의 PACs를 구별할 수 있는” 것은 하나도 없다고 리뷰는 말합니다.2 생약 의약품에 관한 유럽 지침은 가능한 경우 특이적 절차를 선호하며, 비특이적 함량 분석의 타당성이 입증되는 경우에는 두 번째 시험을 제시합니다. “함량 분석과 적절한 확인 시험(예: 핑거프린트 크로마토그래피)을 조합하여 사용할 수 있다”는 것입니다.1 밸리데이션 지침은 이를 일반 원칙으로 정리합니다. 특이성이 부족한 경우 “적절하게 타당성이 입증되지 않는 한, 하나 이상의 다른 보조 분석 절차로 보완해야 한다”는 것입니다.3
확인 사항: 방법이 지표성분에 맞는지, 그리고 화합물군 함량 분석을 사용하는 경우 어떤 확인 시험이 함께 수행되는지.
06 / 귀사의 시험실
귀사의 자체 시험도 같은 방법을 사용합니까?
수치는 그것을 산출한 방법으로만 확인할 수 있습니다. 귀사 시험실이 UV 기준으로 작성된 규격에 대해 납품 물량을 HPLC로 시험한다면, 그 결과는 낮게 나오든 높게 나오든 그 규격에 대한 결과가 아닙니다. 한 수치를 다른 수치로 환산하는 일반적인 계수는 없습니다. 그 차이는 추출물에 그 밖에 무엇이 들어 있는지, 그리고 각 결과가 어떻게 표시되는지에 달려 있습니다.
같은 방법을 사용하더라도 두 시험실이 같은 수치를 얻지는 않습니다. 여러 시험실이 참여한 이 연구에서는 시험실 다섯 곳이 같은 크랜베리 샘플 열한 개를 같은 DMAC 방법으로 분석했습니다. 결과는 상대표준편차로 나타냈을 때 시험실 내에서는 평균 4.1%, 시험실 간에는 평균 16.9%(범위 8%에서 32%)의 차이를 보였습니다.7
그러므로 주문 전에 세 가지를 정해 두십시오. 방법(이름, 그리고 약전 또는 문서화된 절차에 대한 참조), 표준품, 그리고 두 시험실의 결과 사이에서 양측이 받아들일 차이입니다. 약전 각조가 있는 의약품의 경우, 다른 방법이 사용되었을 때 어느 방법으로 판정하는지를 유럽 지침이 밝히고 있습니다. “의심이나 분쟁이 있는 경우에는 약전의 분석 방법이 기준이 된다.”1 적용되는 약전 방법이 없는 경우에는 합의한 규격이 그 역할을 해야 합니다. 시험성적서에 관한 당사의 글은 성적서가 도착했을 때 확인할 사항을 다룹니다.
확인 사항: 귀사의 시험실과 성적서의 수치를 산출한 시험실이 같은 방법과 같은 표준품을 사용하는지, 그리고 두 결과 사이의 차이를 양측이 어느 정도까지 받아들이는지.
보낼 내용
방법은 문의와 함께 알려 주십시오
제품에 함량 수치가 중요한 경우 다음을 알려 주십시오:
- 원료, 그리고 둘 이상의 부위가 제공되는 경우 식물 부위;
- 의도한 적용 분야와 목적지 시장;
- 필요한 화합물 또는 화합물군과 목표 함량;
- 귀사 품질 팀이 사용하는 함량 분석법, 그리고 그것이 분석의 일부인 경우 표준품;
- 납품 물량을 직접 시험하실 계획인지, 그리고 어떤 방법으로 하실지;
- 규격서나 시험성적서 등 필요한 기술 문서;
- 성함, 회사명, 연락처.
활성 성분 함량 비율은 분석법과 기준 표준품을 함께 제시할 때 더 유용합니다. 이러한 요구 사항을 목표 함량과 함께 알려 주시면 규격과 견적서에 프로젝트에 필요한 소재가 반영됩니다. 카탈로그의 규격 범위는 참고용입니다. 실현 가능성, 공급 가능 여부 및 가격은 견적 시 확인됩니다.
제품 예시는 YOHOLIFE®의 규격과 기술 문서에서 가져왔습니다. 이 글은 당사 원료에 대한 다른 함량 수치를 제시하지 않으며, 선택한 등급의 방법과 규격은 문의 시 확인됩니다. 출처 1, 3, 4, 5는 의약품을 위해 작성된 문서이며 여기서는 그 정의와 예시를 인용하기 위해 사용했고, 출처 2는 발표된 연구에 대한 리뷰이며, 출처 6과 7은 크랜베리에 대한 하나의 분석법을 다룬 연구이며, 발표된 초록만 읽었습니다. 출처는 2026년 11월 12일에 확인했습니다.
